In generale, a causa della complessa composizione del sangue, molte sostanze, specialmente il plasma o il siero di animali superiori, hanno un forte effetto di interferenza sulla reazione tra il reagente TAL (LAL) e l'endotossina. Pertanto, quando testiamo l'endotossina di tali campioni, dobbiamo rimuovere le sostanze interferenti prima del test.

Attualmente, le sostanze interferenti nel plasma includono principalmente vari inibitori della proteasi, proteine ​​leganti le endotossine e inibitori del plasminogeno. Per la colorimetria, il fattore Xa può decomporre la catena peptidica Boc-LEU-Gly-Arg-PNA. Pertanto, è necessario eliminare queste sostanze interferenti prima della determinazione.

I metodi di pretrattamento per rimuovere le sostanze interferenti nel sangue sono i seguenti:

(1) Metodo di riscaldamento della diluizione: il plasma viene diluito di 3 ~ 10 volte con acqua disciolta e quindi riscaldato in acqua a 37 ~ 100 ℃. Il tempo di mantenimento è generalmente di 5~10 minuti;

(2) Metodo di estrazione del cloroformio: aggiungi la stessa quantità di cloroformio al plasma e vibra per 3 ore, quindi prendi lo strato superiore per il rilevamento;

(3) Metodo di trattamento con etere: aggiungere etere al plasma per il trattamento e rimuovere l'etere a 40 ℃;

(4) Metodo dell'acido trifluoroacetico: aggiungere acido acetico in un plasma per regolare il pH 4,0, quindi utilizzare K2HPO4 per regolare il pH a 7~7,5;

(5) Metodo di trattamento del tensioattivo: come il metodo di riscaldamento della diluizione, solo l'acqua di diluizione viene trasformata in tensioattivo;

(6) Filtrazione su gel;

(7) Metodo di trattamento alcalino: il plasma è stato mantenuto a 0.2NNaOH 37 ℃ per 10 minuti e poi neutralizzato con HCl;

(8) Metodo dell'acido perclorico (PCA) o nuovo metodo dell'acido perclorico (New PCA);

(9) Metodo delle perle: inserire la speciale resina che assorbe l'endotossina nel plasma, estrarla e aggiungere il reagente LAL per la reazione.

Tra questi metodi, i metodi comunemente usati sono il metodo di estrazione del cloroformio, il metodo di riscaldamento della diluizione, il metodo dell'acido perclorico (PCA) e il nuovo metodo dell'acido perclorico (New PCA). I primi due metodi devono essere discussi durante la determinazione a causa dell'esistenza del tasso di recupero dell'endotossina, dei falsi positivi e di altri problemi. Il metodo PCA (metodo New PCA), grazie al buon tasso di recupero dell'endotossina aggiunta, è attualmente utilizzato principalmente nel trattamento preclinico in Giappone.