La centrifuga di congelamento desktop a bassa velocità viene utilizzata in laboratorio per la separazione primaria e l'estrazione di macromolecole biologiche, sedimenti, ecc. La sua testa girevole è realizzata principalmente in lega di alluminio, che è di tipo piatto e ad angolo. Il tubo centrifugo è realizzato in vetro duro, plastica dura in polietilene e tubo in acciaio inossidabile. La centrifuga è dotata di un motore di azionamento, un timer, un regolatore (indicatore di velocità) e un sistema di refrigerazione (l'intervallo di temperatura regolabile è - 20 ~ 40 ℃), che può sostituire le teste rotanti con diverse capacità e diversi tipi di velocità di rotazione in base alle esigenze del materiale centrifugo.

Fasi dettagliate della centrifugazione per l'estrazione di proteine ​​citoplasmatiche e nucleari mediante centrifuga di congelamento desktop a bassa velocità:

1. Determinare lo stato di crescita cellulare. Lo stato di crescita cellulare dovrebbe essere dell'80% o superiore:

2. Centrifugare a 1500 giri/min per 5 minuti

3. Eliminare il surnatante, lavare le cellule con uguale volume di PBS freddo e ripetere 3 volte come al punto 2

4. In base alla quantità di precipitazione stimata, aggiungere 5 volte il volume di sisbuffer isotonico nelle particelle cellulari per far sospendere delicatamente le cellule ed evitare la schiuma il più possibile

5. Aggiungere il tampone di lisi nelle cellule sospese e metterlo sul ghiaccio per 15 minuti per consentire alle cellule di espandersi, che possono essere controllate al microscopio

6. Per le cellule espanse nell'esperimento cellulare, aggiungere il 10% di IGEPALCA-630 per fare in modo che la concentrazione finale raggiunga lo 0,3%, mescolare bene e aggiungere delicatamente

7. Centrifugare immediatamente (utilizzare una provetta EP da 1,5 ml a 5500 giri/min per 30 secondi per grandi quantità; utilizzare una provetta da 50 ml a 5500 giri/min per 2 minuti per grandi quantità)

8. Trasferire il surnatante (proteina citoplasmatica) in una nuova provetta di congelamento

9. Sospendere le cellule con 5 volte il volume delle particelle sospese in tampone isotonico e miscelare bene

10. Centrifugare la sospensione cellulare a 1500 giri/min per 5 minuti e rimuovere il supernatante

11. Sospendere le particelle con 2/3 volte il volume del tampone di estrazione

12. Posizionare il tubo sul miscelatore vibrante, agitare e miscelare a 700 giri/min per 15 minuti, quindi a 1400 giri/min per 15 minuti. L'intero processo dovrebbe fare attenzione a evitare la schiuma

13. Centrifugare a 9400 giri/min per 15 minuti, trasferire il surnatante in una nuova provetta da centrifuga congelata dopo la centrifugazione a bassa temperatura

14. Dividere in più parti e congelarle con azoto liquido e conservarle (la conservazione a lungo termine dovrebbe essere a - 80 ℃, la conservazione a breve termine dovrebbe essere a - 20 ℃)