Come materiale ausiliario negli esperimenti di rilevamento ELISA, un enzima piatto svolge un ruolo decisivo e influisce direttamente sui risultati sperimentali finali. La qualità del Piatto enzimatico dipende principalmente dalla sua sensibilità all'adsorbimento proteico, dalla differenza nella capacità di adsorbimento proteico tra piastre e fori e dalla differenza tra i lotti del prodotto acquistato piastra enzimatica . Pertanto, selezionando un piastra enzimatica prodotto con elevata sensibilità all'adsorbimento proteico, la piccola differenza tra i fori della capacità di adsorbimento proteico e una piccola differenza tra i lotti è la garanzia per lo sperimentatore di ottenere risultati sperimentali affidabili e stabili.

Piatto enzimatico classificazione: secondo diversi standard di classificazione, il piatto ha diverse classificazioni.

1: In base al numero di fori, può essere suddiviso in 96 fori, 48 fori, ecc piastra enzimatica viene utilizzato principalmente con il lettore di micropiastre, the piatto metro sul mercato è al massimo di 96 fori, quindi la micropiastra è di 96 fori.

2: Secondo i diversi fondi, è diviso in fondo piatto, fondo a U, fondo a V, ecc.

L'indice di rifrazione della base piatta è basso, adatto per il rilevamento nella micropiastra;

T L'indice di rifrazione della micropiastra U è elevato, conveniente per il campionamento, il campionamento e la miscelazione e può osservare direttamente il cambiamento di colore senza posizionarlo sulla micropiastra, in modo da determinare se esiste una reazione immunitaria corrispondente.

La micropiastra della base V può assorbire accuratamente il campione.

3: In base alle diverse capacità di legame della micropiastra e delle proteine ​​e di altre molecole, è suddivisa in forza di legame elevata, forza di legame media e amminazione.

(1) Elevata forza legante

Dopo la superficie di questa micropiastra, la sua capacità di legare le proteine ​​è notevolmente migliorata, fino a 300~400 ng IgG/cm2, e il peso molecolare della proteina principale legata è > 10 kD. L'uso di questa classe di micropiastre può migliorare la sensibilità e può ridurre relativamente la concentrazione e la quantità di proteine ​​rivestite, che è più facile produrre reazioni non specifiche. Dopo il rivestimento con antigene o anticorpo, il detergente non ionico non può sigillare efficacemente il sito della proteina non legata e la proteina deve essere utilizzata come agente sigillante.

(2) Forza legante media

Tali micropiastre si legano passivamente alla proteina attraverso legami idrofobici sulla superficie e sono adatte come carrier in fase solida per proteine ​​macromolecolari con peso molecolare > 20 kD, con una capacità di legame proteico da 200 a 300 ng IgG/cm2. A causa delle caratteristiche del suo unico legame con le macromolecole, è adatto a vettori in fase solida come anticorpi o antigeni non purificati per ridurre il potenziale di reattività crociata aspecifica. La piastra può essere una proteina inerte o un detergente non ionico come soluzione sigillante.

(3) Aminazione

Questa micropiastra dopo una modifica superficiale ha un gruppo amminico caricato positivamente, il cui legame idrofobico è sostituito da un legame idrofilo. Questa classe di micropiastre è adatta come vettore in fase solida per proteine ​​a piccole molecole. Utilizzando un tampone e un pH adeguati, la superficie si lega a piccole molecole caricate negativamente tramite legami ionici. Grazie alle proprietà idrofile della sua superficie e alla sua capacità di essere legato in modo covalente da altri reticolanti, può essere utilizzato per fissare molecole proteiche solubili in agenti decontaminanti come Triton-100, Tween 20, ecc. Il difetto di questa piastra è a causa della ridotta idrofobicità; inoltre, la superficie deve essere efficacemente chiusa. A causa delle proprietà superficiali idrofile e covalenti, la soluzione sigillante utilizzata deve essere in grado di interagire con qualsiasi gruppo funzionale nel gruppo amminico non reattivo e con il reticolante selezionato.

4. Secondo il colore può essere diviso in trasparente, nero e bianco.

Il trasparente è il più comunemente usato per gli esperimenti di immunizzazione più generali legati agli enzimi. In Rel, in contrasto con la micropiastra trasparente, sono presenti anche micropiastre opache per il rilevamento luminoso, generalmente in bianco e nero. La stessa micropiastra nera ha un assorbimento della luce, quindi il suo segnale è molto più basso della micropiastra bianca, quindi viene generalmente utilizzata per rilevare una luce forte, come il rilevamento della fluorescenza. La micropiastra bianca viene utilizzata per il rilevamento della luce debole, spesso utilizzata per la chemiluminescenza generale. Inoltre, la micropiastra nera può anche attenuare il problema delle reazioni non specifiche. Allo stesso tempo, è importante notare che con la micropiastra generale non può essere rilevato luminoso, perché la luce emessa dalla reazione di chemiluminescenza è isotropica, se, con una micropiastra trasparente, la luce non si diffonderà solo dalla direzione verticale, ma anche dalla direzione orizzontale, fai luce facilmente attraverso lo spazio tra il foro e la parete del foro, con il risultato che la luce del valore di assorbimento della luce del foro è influenzata dalla luce emessa dal foro adiacente.

Una buona micropiastra dovrebbe avere buone prestazioni di adsorbimento, basso valore del bianco, elevata trasparenza del fondo del foro e prestazioni simili tra le piastre e tra i fori della stessa piastra. A causa della differenza nelle materie prime e della differenza nel processo di produzione, la qualità dei vari prodotti è molto diversa, pertanto le prestazioni di ciascun lotto di micropiastra devono essere verificate in anticipo prima dell'uso. I metodi di ispezione comunemente usati sono una certa concentrazione di IgG umane (generalmente 10 ng/ml) rivestite con pozzetti della piastra ELISA, dopo il lavaggio, l'aggiunta di un'appropriata diluizione di anticorpo anti-IgG umano marcato con enzima a ciascun pozzetto, il lavaggio dopo la conservazione a caldo, aggiungendo il colore del substrato, arrestare la reazione enzimatica e misurare rispettivamente l'assorbanza della soluzione in ciascun pozzetto. Le condizioni di reazione sono state controllate in modo che la lettura di ciascun pozzetto fosse mantenuta ad un'assorbanza di circa 0,8. È stata calcolata la media delle letture totali. La differenza tra la media di tutte le singole letture e tutte le letture deve essere inferiore al 10%. Le seguenti tre micropiastre sono A, B e C come esempio.

Metodo diretto: per rilevare l'adsorbimento di IgG umane sulla superficie della micropiastra

Metodo sandwich con doppio anticorpo: antigene nel siero positivo per anticorpo antiumano

Come si può vedere dalla figura sopra, in questi tre tipi di piastre bioenzimatiche, la micropiastra di classe A ha un migliore effetto di adsorbimento proteico, ma migliora anche la sensibilità dell'adsorbimento proteico, che può fornire dati sperimentali più affidabili. Inoltre, puoi chiedere informazioni sulla targa della differenza di lotto. Quanto segue è la differenza di lotto di una determinata piastra. Come si può vedere dal grafico dei dati sulla differenza all'interno del lotto, la micropiastra ha una buona stabilità tra i lotti e la differenza del coefficiente di variazione (CV) all'interno del lotto è di circa il 5,0%, che è significativamente inferiore al coefficiente di variazione all'interno del lotto inferiore al 10,0% nello standard di controllo di qualità per la reazione immunitaria clinica. Pertanto, quindi è adatto anche per esperimenti ELISA.