R ecovery

1. Rimuovere la provetta congelata dall'azoto liquido e immergerla immediatamente in un bagno d'acqua a 37 ℃, agitando leggermente. Dopo che il liquido si è sciolto (circa 1-1,5 minuti), prendi dell'alcool e mettilo sul tavolo da lavoro ultra pulito.

2. Trasferire la sospensione cellulare in una provetta da centrifuga da 15 ml con 10 ml di terreno (lavare la provetta congelata con il terreno e lavare tutte le cellule attaccate alla parete) e centrifugare a 1000 per 5 minuti.

3. Il supernatante è stato invertito ed è stato aggiunto 1 ml del terreno per sospendere le cellule. Fumare in un piatto da 10 cm con 10 ml di terreno e agitare delicatamente a sinistra ea destra per distribuire uniformemente le cellule nel piatto.

4. Contrassegnare il tipo di cellula e la data, il nome umano e così via, inserirlo nell'incubatore a CO2, incollare le cellule e cambiare il terreno.

5. Il mezzo è stato cambiato una volta ogni 3 giorni.

P assaggio

1. Le piante sono state passate per raggiungere l'80-90% di copertura.

2. Abup il mezzo originale .

3. Aggiungere la tripsina appropriata (basta coprire le cellule) e digerire per 1-2 minuti .

4. La digestione è stata terminata aggiungendo un volume uguale del mezzo contenente siero .

5. Soffiare le cellule con una pipetta e lasciarle tutte sospese.

6. Le cellule sono state aspirate in una provetta da centrifuga da 15 ml e centrifugate a 1000 per 5 min.

7. Versare il supernatante e aggiungere 1-2 ml di terreno per far esplodere tutte le cellule.

8. Le cellule sono state passate a diversi piatti di coltura a seconda della specie cellulare. Generalmente, le cellule tumorali sono divise in 5 cellule e vengono trasmesse tre cellule normali. Continua a coltivare.

Libero di digerire le cellule e centrifugarle (ibid. sopra).

Sospendere le celle con la soluzione di conservazione congelata abbinata, dividerle in un tubo congelatore sterilizzato, riposare per alcuni minuti e specificare il tipo di cella e la data di conservazione congelata.4℃ 30min, -20℃ 30min, -80℃ durante la notte e quindi conservato in perfusione di azoto liquido.

Preparazione della soluzione di crioconservazione: 70% medio 20% FBS 10% DMSO. DMSO dovrebbe essere aggiunto lentamente e agitato costantemente.