1. Quando si determina l'endotossina nel sangue, prestare attenzione alla selezione di metodi e reagenti.

2. Preparazione di plasma o siero

Come campione clinico comune, il plasma è il campione principale e il suo tasso di utilizzo è superiore al 95%. Pertanto, è molto importante preparare il plasma come parte principale del fluido corporeo. Secondo Das, l'endotossina è generalmente attaccata alle piastrine oltre al suo stato libero, quindi è più appropriato utilizzare il plasma contenente un gran numero di piastrine come campione. Quando si prepara il plasma umano o il plasma animale, attualmente, al fine di prevenire il danno cellulare, i paesi stranieri utilizzano principalmente la separazione a bassa temperatura, utilizzando campioni di plasma contenenti un gran numero di piastrine, ovvero a 4 ℃ 1000gx10 minuti condizioni di separazione o 3000gx40 secondi condizioni di separazione in assenza di centrifuga a bassa temperatura. Non è consentito condurre separazioni ad alta velocità ea lungo termine a temperature normali. Inoltre, durante la separazione del plasma o del siero, deve essere evitata la contaminazione batterica.

Preparazione del siero: utilizzare una siringa senza anticoagulante per raccogliere il sangue e trasferirlo in una provetta da centrifuga e metterlo in un bagno di acqua ghiacciata per 30 minuti, a 4 ℃, 1000xg, 10 minuti per la centrifugazione.

Dopo la separazione del plasma o del siero, se non utilizzato temporaneamente, può essere congelato a -80 ℃ e utilizzato entro 1 mese. Nota Per evitare l'assorbimento di endotossina, utilizzare una provetta di vetro per la conservazione.

3. Tipi ed effetti degli anticoagulanti

Durante la preparazione del plasma, a causa dell'aggiunta di alcuni anticoagulanti, il tipo e la quantità di anticoagulanti hanno un grande impatto sul tasso di recupero. In generale, gli anticoagulanti comunemente usati includono principalmente l'eparina, il citrato di sodio e l'EDTA, tra i quali l'eparina è il più utilizzato. Tuttavia, sappiamo che una grande quantità di eparina interferirà con la reazione dell'endotossina, in particolare per il metodo di riscaldamento della diluizione e il metodo di estrazione del cloroformio, che ridurrà il tasso di recupero, ma avrà un impatto minore sul metodo PCA, quindi la quantità di eparina aggiunta e rilasciato durante la preparazione del plasma richiede solo 2 ~ 5 μ L/ml è sufficiente.